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UMNSAH/DF-1细胞传代第二天细胞不贴壁怎么办?

人阅读 发布时间:2022-12-30 16:51

 UMNSAH/DF-1细胞正常生长照片

细胞基本属性

细胞名称:UMNSAH/DF-1(鸡胚成纤维细胞)

细胞别称:UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1

细胞类型:成纤维细胞

生长特性:贴壁

培养条件:DMEM+10% FBS+1% P/S

培养环境:空气,95%;二氧化碳 (CO2),5%

细胞简介:UMNSAH/DF-1细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡成纤维细胞株,自发永生化。分离的原代鸡胚成纤维细胞在培养液中培养,传代直到衰老,在培养过程中保持细胞在30%到60%密度,不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖,说明UMNSAH/DF-1细胞是永生化而没有转化。UMNSAH/DF-1细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。

 

客户养的UMNSAH/DF-1鸡胚成纤维细胞,现在是第5次传代,这次是1:3传代,用的是上图胰酶1毫升,消化2一3分钟,反馈是此次传代的第2天很多细胞不贴壁,帮忙看一下。

小尚解答

消化时间太长了,该细胞消化时间短,注意控制消化时间及吹打力度。细胞消化至变圆可以轻松吹下时即可终止消化,不能消化至完全漂浮。对于消化这步,客户如果对该细胞经验不多,无法准确掌控胰酶作用时间,建议客户按照下述操作:

胰酶首先复温到室温后加入细胞,放入37度培养箱,然后每隔30秒,即吹打下细胞(此时吹打细胞应尽量轻柔,不能强行将细胞吹下,否则细胞可能出现机械损伤),如果能够吹打散细胞,说明细胞消化完成可以终止消化,如果30秒吹打不下,再等30秒重复操作。消化完成后加3-4ML完全培养基终止消化,混匀细胞,收集细胞悬液900-1000rpm离心3min,弃上清。再加5ml PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗一次。传代24h后可以观察细胞,若死亡细胞及碎片较多建议PBS润洗下贴壁的细胞,再加新的培养基继续培养。

2.目前细胞活力较差,死细胞偏多,建议静置培养一天看一下,若明天细胞仍然不贴壁就不建议继续培养了。若有保种的冻存细胞可以重新复苏培养。

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【SNL-006】UMNSAH/DF-1(鸡胚成纤维细胞)

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【SNLM-006】鸡胚成纤维细胞专用培养基

 

公 司 简 介

武汉尚恩生物技术有限公司坐落于武汉东湖高新区光谷生物城,专注于细胞及系列产品的研发、生产和服务,公司建有标准化GMP实验室、动物房,已整体通过ISO 9001:2015质量管理体系认证,获得高新技术企业、3551人才、瞪羚企业、科技小巨人等多项荣誉。  

公司主要研发生产细胞系、原代细胞、胎牛血清、基础培养基、完全培养基、辅助试剂等系列产品,提供细胞及培养配套产品一站式采购;细胞库冻存细胞系500余种,同时通过不间断引种细胞扩大丰富细胞种类;公司还提供人源细胞系的STR鉴定、大小鼠的种属鉴定服务等。  

公司细胞业务覆盖国内各大高校生物实验室、生物研究机构及一些生物科研、诊断、制药公司,不断为广大科研工作者提供最优质的产品和服务!尚恩生物—您专业的细胞供应商!

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