细胞攻略 | MM.1S(人多发性骨髓瘤细胞)培养教程

细胞半贴壁生长，部分悬浮生长，部分轻微贴壁生长。换液时，可将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶，如果贴壁细胞较多活性较好时也可以不要悬浮的细胞。当贴壁细胞不容易吹下来时，可以添加0.25%胰酶（EDTA）在37℃消化20S（消化时间仅供参考）。

 细胞对密度有一定依赖性，建议传代密度不要过低，接种密度可以维持在40-80万/ml，当密度达到100万/ml及以上，即可传代。接种密度过低，会导致细胞生长变慢，甚至是导致细胞死亡。

培养过程中，胞外会有较多黑点，是细胞碎片，通常不会影响细胞生长。如果细胞碎片较多，可以通过低速离心去除部分，也可以用预热的PBS润洗细胞，操作尽量轻柔。

该细胞复苏后，恢复时间较长，大约需要1-2周才能恢复正常生长。建议高密度冻存，推荐使用冻存液：92%FBS+8%DMSO。

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

2. 将培养瓶竖立静置一段时间，待细胞沉底；（肉眼观察细胞沉底情况）

3. 吸头紧贴液面，小心吸出一半的培养基，转移到离心管；

4. 900-1000rpm 3min离心，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶；

5.原瓶补充一半的新鲜培养基。

1. 备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；

3. 900-1000rpm，3min离心；

4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，再900-1000rpm，3min离心；

5. 培养瓶中加入适量新鲜培养基；

6.离心完成后弃上清，加适量新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种回培养瓶中，混匀细胞，放入培养箱中继续培养。

1. 备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）

2. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液转移至离心管中；使用1ml枪头轻吹贴壁细胞，如果不好吹下来，可以使用胰酶消化下来，也转移至离心管中；

3. 900-1000rpm，3min离心收集细胞；

4. 在培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐10mL，T75推荐20mL）

5. 离心完成后，弃离心管内上清，然后加入适量新鲜培养基，轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。

1.准备所需的培养基、PBS、血清、DMSO、离心管以及无菌枪头等；（试剂需提前预热）

2. 根据收集到细胞量，配制相应量的冻存液，并准备相应数量的冻存管，在冻存管上标志细胞名称，代次，冻存时间等信息。推荐冻存液配方：92%FBS+8%DMSO；冻存密度300万细胞/mL/管。

3. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm，3min离心收集细胞；

4. 离心完成后弃上清，加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞，将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度，不要产生过多气泡；

5. 将细胞放置程序降温冻存盒中，再将冻存盒转移至-80℃冰箱进行降温冻存。

6. 次日（16h-24h后）复苏一管检查冻存效果，确认没问题后及时将冻存细胞放置液氮中保存，细胞在-80℃冰箱放置时间不要超过3天。

1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温至室温或37℃，离心机设置好转速；

2. 将冻存细胞从液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速摇晃至完全融化，融化时间不超过2min；

3. 直接将冻存管900-1000rpm 3min离心，同时在培养瓶中加入适量新鲜培养基；

4. 离心完成后弃上清，吸取1mL新鲜培养基轻轻重悬细胞，吹散细胞后接种到培养瓶中；

5.使用十字法或8字法将细胞混匀后置于培养箱中培养。

1. 拆封包装盒，确认细胞，说明书等是否齐全，收货细胞名与所购买细胞是否符合；

2. 观察细胞培养瓶是否完好，有无漏液，培养瓶内培养基是否有肉眼可见的絮状物或者浑浊等，发现异常及时拍照联系销售人员；

3. 确认无异常后，将培养瓶表面消毒，然后撕掉封口膜竖立放入培养箱平衡4h左右，让悬浮细胞沉下培养瓶底部；

4. 平衡过程中可以仔细阅读细胞说明书，知悉细胞所需培养体系，培养环境以及培养注意事项等；

5. 平衡完成后竖立取出细胞培养瓶，此时大部分细胞沉在培养瓶底部，小心吸取上清至离心管中，保留10mL左右培养基在培养瓶内，小心操作，尽量不要吸到沉在底部的细胞；

6. 将离心管1200rpm，5min离心收集未沉下培养瓶底部的细胞，上清可以4℃保存，后续用于培养细胞，以平稳过度到自己的培养基。将收集到的细胞接种至原培养瓶；

7. 观察细胞，根据细胞状态，以及团块数量、大小决定传代或继续培养。