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293细胞收货后怎样判断细胞状态是否异常?

人阅读 发布时间:2022-12-09 10:50

细 胞 基本信息

细胞名称:293 人胚肾细胞

细胞别称:Hek293; HEK-293; HEK/293; HEK 293; HEK;293; 293; 293 HEK; 293 Ad5; Graham 293; Graham-293; Human Embryonic Kidney 293

细胞类型:上皮细胞

细胞简介:293 [HEK-293]细胞人类胚胎的肾脏中分离的表现出上皮形态的细胞,后经剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞,293 [HEK-293]细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出,293 [HEK-293]细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点测序发现,Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主,可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。293细胞表达玻连蛋白。293细胞可用于工业生物技术和毒理学研究,功效测试和病毒测试中也有应用。

293细胞正常生长形态照片

操 作 实 例

293细胞收货后细胞都是圆形聚集的,有的没有贴壁,细胞是不是死了?

小尚回答:

照片上看细胞活性是没有问题的。由于293细胞对温度敏感,且贴壁弱,T25发货运输过程可能会有部分细胞边缘漂浮是正常现象,并不是细胞死亡或者状态不佳。

 

1.反馈图片上看大部分细胞都贴壁了,漂浮细胞不多的话可以按照正常操作消化重新接种。该细胞消化时间较短,注意控制消化时间不能过长,消化时间通常会在1min内。

2.若T25瓶内漂浮的细胞团块较多,可以按照下述步骤离心收集,再进行消化处理。

 

①收集所有培养基及漂浮细胞到无菌50ml离心管,1000rpm,5min离心收集细胞沉淀。

②取培养基上清到4℃保存,用于培养细胞,以平稳过度到客户自己的培养基。在原50ml离心管中加入5mlPBS重悬细胞沉淀,尽量吹散后1000rpm,5min离心,弃上清。

③加入1ml胰酶轻轻震荡混匀,勿直接吹打细胞。然后放入培养箱消化1min左右,消化完成后用移液器轻轻吹打几下,吹散细胞后立刻加5ml完培终止消化。1000rpm,5min离心,弃上清。

④加入1ml完培重悬细胞接种到新培养瓶中。T25加10-12ml培养基培养,通常2-3天左右换液一次,若培养基变黄及时换液,以维持一个相对稳定的培养条件,有利于细胞活正常生长。

⑤原T25剩余贴壁细胞密度大于70%,可以正常消化传代;贴壁细胞较少可以加培养基正常培养至70%密度以上消化传代;若几乎没有细胞则可以丢弃。

⑥若出现传代后次日贴壁较少的情况,可以收集培养基及漂浮细胞到离心管,离心收集未贴壁细胞,然后加新培养基尽量重悬吹散后接种回原培养瓶让细胞继续贴壁,注意小心操作,避免将已贴壁细胞吹下。

 

注意事项

1.由于293系列细胞(包括293、293T、293F等几乎所有衍生系)均贴壁较弱,且对温度非常敏感,低温时经常出现细胞变圆甚至脱落的现象,因此细胞观察时应注意不要室温放置太长时间、不要使用过低温度的培养基、胰酶、PBS等试剂处理细胞。

2.运输后出现细胞变圆脱落情况时,脱落现象不严重仅是变圆时可以平衡细胞2h以上再按正常步骤消化细胞即可,若脱落较严重甚至大量聚团漂浮时建议直接收集细胞离心后消化再重新接种。

3.由于293细胞本身贴壁较弱细胞消化时间本身较短,必须控制消化时间和吹打力度,避免细胞消化或吹打死亡过多导致无法正常贴壁生长。消化时间过长、吹打力度过大等均可能导致细胞传代死亡或者不长,尤其是脱落后的细胞会更敏感,切记注意操作细节。

 

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公 司 简 介

www.sunncell.com.cn

武汉尚恩生物技术有限公司坐落于武汉东湖高新区光谷生物城,专注于细胞及系列产品的研发、生产和服务,公司建有标准化GMP实验室、动物房,已整体通过ISO 9001:2015质量管理体系认证,获得高新技术企业、3551人才、瞪羚企业、科技小巨人等多项荣誉。  

公司主要研发生产细胞系、原代细胞、胎牛血清、基础培养基、完全培养基、辅助试剂等系列产品,提供细胞及培养配套产品一站式采购;细胞库冻存细胞系500余种,同时通过不间断引种细胞扩大丰富细胞种类;公司还提供人源细胞系的STR鉴定、大小鼠的种属鉴定服务等。  

公司细胞业务覆盖国内各大高校生物实验室、生物研究机构及一些生物科研、诊断、制药公司,不断为广大科研工作者提供最优质的产品和服务!尚恩生物—您专业的细胞供应商!

END

 

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