如何养出形态漂亮的细胞经验分享

养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。

不同的细胞，喜欢的环境是不一样的！

这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。

很多新手认为细胞没有养好是细胞状态和培养基的问题，忽略了细胞生长的空间密度问题对细胞生长的影响。对于生长速度较快、状态良好的细胞，应该在传代时降低密度，给它足够的生长空间，否则会因为繁殖过快造成细胞拥挤，就养不出形态漂亮的细胞。反之，遇到生长缓慢的细胞，如果在传代时保留密度较低，稀稀拉拉的分散在各个角落，这样更不利于细胞生长。

譬如内皮细胞，这种一般是属于生长速度慢的细胞。它属于数量多一点比较好生长，生长状态也比较好；又譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞，它属于细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。

所以在养细胞的时候不仅要摸索每个细胞喜欢的培养基，还应该摸索它最合适的生长空间密度。这样有针对每一个细胞的习性培养才会养出漂亮健康的细胞。 

养细胞就如同照顾一个有娇弱又不会说话的婴儿，因此需要用心和细致，时常观察它的状态，摸清它的习性。在它要出现不好的苗头的时候，提前帮它解决这个问题。关于养细胞，后面我还有其它经验分享，宝贝们要耐心看哦 ～

有些人总会遇到细胞形态不好的问题，这个其实是有一个我自己用的小技巧可以改善的。

首先，正式传代前进行「预吹打」，可以洗掉一部分多余细胞团和表面异物等；然后在传代之后进行「二传」，即滤掉那些贴壁缓慢、状态较差的虚弱细胞。

对于细胞形态不好的贴壁细胞，譬如细胞形态不清晰，表面似有异物等，可以在传代的时候进行如下操作：

首先，倒掉旧的培养基，加入 3 ml 新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入 3 ml 的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时候再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）

其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10 分钟观察一次，20 分钟，30 分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入 3 ml 新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。这种方法我自己称之为「二传」。

如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意结合细胞喜欢的生长环境培养。喜欢细胞数量多一点才能长得好的细胞，就等贴壁细胞沉淀贴壁数量比较多点的时候再传。反之亦然。

另外，补充换液传代时候洗瓶的问题。这个发现没有经过大规模验证。

对于用 DMEM 培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清 1640 去洗细胞在随后的几次中会比用 DMEM 洗的长的要好。同样，用 1640 培养的也有这个现象。

如果不嫌麻烦的话，可以用 PBS 来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。