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【常见问题】细胞培养基里如何合理消化细胞
1866 人阅读发布时间：2021-04-25 10:27
我们都知道，细胞长满了就需要传代，而传代时的消化步骤是决定细胞传代后存活率的关键。不同的细胞贴壁程度差异、胰酶活性差异、甚至细胞在不同状态下贴壁程度都有差异，怎么才能找到一个合适的消化方法和时间呢？下面我们就说道说道怎么合理的消化细胞才能让传代的细胞长得更好。
首先要选择合适的胰酶，胰酶活性太强或太弱都不行。活性太强的胰酶消化时间会很短，控制不好容易消化过度；活性太低的胰酶消化时间过长，细胞长时间泡在胰酶里也必然状态会变差，所以选择一种大部分细胞消化时间都在1-5min之间的胰酶比较合适。如果胰酶活性比较强，可以用PBS稀释几倍再用，胰酶活性比较弱的话那就只能更换了。一般新配的胰酶活性会比较强，保存时间比较久的胰酶活性会下降。
其次，胰酶、PBS和完全培养基要复温后再用，不要用冰冷的液体接触细胞。胰酶消化前要用PBS润洗清除残留的完全培养基，尽量吸干净PBS，如果有条件的话可以PBS润洗两次或者PBS润洗一次再用胰酶润洗一次，每次润洗尽量吸干净残留的液体，避免影响胰酶活性。加胰酶后，轻轻晃动培养瓶，让胰酶尽量浸没瓶底的每一个地方，然后放到培养箱静置消化。消化到细胞在镜下观察间隙变大，然后在超净台里吸取正在消化的胰酶轻轻吹打细胞，如果消化好了就可以明显看到吹打过的细胞脱落一块。如果没有消化后可以放回培养箱继续消化30s左右再吹打看看，细胞可以脱落就行了。千万不要把细胞消化到完全漂浮或者成片脱落，这样就有点消化过度了，比较坚强的细胞还没什么问题，一些不好养的细胞就非常容易死亡。
最后，消化完成后再加完全培养基终止消化在吹下细胞混匀，一般加3-4倍胰酶体积的终止液就够了。一些贴壁比较紧的细胞建议消化完成后，吸取正在消化的胰酶先吹下细胞，再加终止液混匀吹打细胞，否则先加终止液的话细胞很快会重新贴回去导致吹不下来。
其次，胰酶、PBS和完全培养基要复温后再用，不要用冰冷的液体接触细胞。胰酶消化前要用PBS润洗清除残留的完全培养基，尽量吸干净PBS，如果有条件的话可以PBS润洗两次或者PBS润洗一次再用胰酶润洗一次，每次润洗尽量吸干净残留的液体，避免影响胰酶活性。加胰酶后，轻轻晃动培养瓶，让胰酶尽量浸没瓶底的每一个地方，然后放到培养箱静置消化。消化到细胞在镜下观察间隙变大，然后在超净台里吸取正在消化的胰酶轻轻吹打细胞，如果消化好了就可以明显看到吹打过的细胞脱落一块。如果没有消化后可以放回培养箱继续消化30s左右再吹打看看，细胞可以脱落就行了。千万不要把细胞消化到完全漂浮或者成片脱落，这样就有点消化过度了，比较坚强的细胞还没什么问题，一些不好养的细胞就非常容易死亡。
最后，消化完成后再加完全培养基终止消化在吹下细胞混匀，一般加3-4倍胰酶体积的终止液就够了。一些贴壁比较紧的细胞建议消化完成后，吸取正在消化的胰酶先吹下细胞，再加终止液混匀吹打细胞，否则先加终止液的话细胞很快会重新贴回去导致吹不下来。