流式实验对照组设置指南！

引言

大家都知道在所有实验中，都必须设置对照组，在类似WB、ELISA等实验设置对照组相对简单，主要目的是比较处理和未处理组的差异、证明处理有效等作用。但在流式细胞术实验中，设置对照组的目的除了证明处理有效，更重要的是需要通过设置合理对照，定义什么是信号、什么是噪音，流式实验中设置正确的对照组是获得可靠数据、区分特异性信号与背景噪音的关键。接下来我们来了解下流式实验中常见的对照类型及作用。

Section 01 — 空白对照

空白对照最基础、最常见的对照，是指未经任何荧光染色的细胞样本。空白对照的作用是：

1.  调节仪器电压：用于确定细胞的基础信号水平（即自发荧光），帮助将仪器各通道的电压设置在合理范围，避免信号"压线"；

2.  界定阴性细胞群：在FSC/SSC散点图上圈定目标细胞群，并作为后续判断阳性的基础参照。

Section 02 — 补偿（单染）对照

在多色流式实验中，由于不同荧光染料的发射光谱会重叠，必须进行荧光补偿校准，这就需要单染对照。单染对照即分别只染一种抗体的样本，有多少色的流式抗体就要做多少个单染对照。单染对照作用是：

.用于计算每个荧光染料渗漏到其他通道的比例；

.通过软件去除光谱重叠，校准荧光光谱重叠；

.确保每个通道检测到的都是"专属"信号。

 提示：当目标抗原表达较弱时，可使用补偿微球替代细胞来制备单染对照。

Section 03 — FMO 对照

FMO对照即少一个荧光通道的完全染色管（fluorescence minus one），需要这种对照是因为在多色流式实验中（尤其是大于4色的），即使其他荧光经过补偿，其扩散误差仍会提高阴性群的背景，FMO对照能完美反映这种"本底"，是设置阳性门最准确的方法，对弱阳性或连续表达的抗原尤为关键。

举例：同时检测CD45RA和其他标志物时，若特别关注CD45RA表达情况，此时FMO对照指不加CD45RA流式抗体而其他流式抗体正常添加的对照，从而更显著地体现CD45RA表达情况，提高数据可靠性和准确性。

Section 04 — 同型（Isotype）对照

同型对照是一种特殊的阴性对照，是指使用与实验抗体同种属来源、同亚型、同荧光标记，但又与样本无特异性结合的抗体进行染色。这是为了排除样本和流式抗体间非特异性结合（包括死细胞/碎片吸附、疏水/静电结合、Fc受体结合等）而设置的，可以有效排除实验过程中因非特异性结合导致的假阳性结果。

Section 05 — 生物学对照

这个实际上就是WB、ELISA等实验中常见的对照组，例如已知阳性、已知阴性的样本，与以上其他对照组相比，这类对照是其他样本，而非实验中本身需要检测的样本，其对照作用体现在确定实验过程正常、处理和未处理样本区别等。

总结

流式实验中，对照组的合理设置尤为重要，合理的对照组设置可以有效避免假阳性、假阴性影响，保证结果准确、可靠和可重复性。

产品介绍

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