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武汉尚恩生物技术有限公司

入驻年限:6

  • 联系人:

    左女士

  • 所在地区:

    湖北 武汉市 江夏区

  • 业务范围:

    细胞库 / 细胞培养、抗体、ELISA 试剂盒、技术服务、医疗器械

  • 经营模式:

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公司新闻/正文

开年上新 | 尚恩生物细胞转染服务正式上线啦!!

194 人阅读发布时间:2025-02-17 14:42

01

 细胞转染概述及应用

细胞转染是指将外源的基因如DNA、RNA等采用各种化学、生物学或物理方法导入真核细胞的技术。是生物医学研究的重要工具,广泛应用于以下方面:

研究基因功能

通过导入特定研究的目的基因,使目的基因过表达,研究其在细胞中的高表达情况下细胞功能的影响。或者利用siRNA或shRNA使目的基因不表达或者表达降低,研究基因缺失情况下对细胞功能的影响。

 

蛋白质表达生产

通过转染编码所需目的蛋白的基因,进行蛋白质表达及纯化,也可以通过融合荧光蛋白,研究目的蛋白在细胞内的分布或者定位。

 

细胞工程

通过转染和筛选,获得能够稳定表达外源基因的细胞系,即构建稳转细胞株。

 

药物筛选与毒性测试

转染特定基因,从而验证药物靶点的有效性。通过高通量筛选,筛选出潜在药物。

 

基因治疗

导入或者修复基因,治疗一些遗传病,也可转染编码抗原基因,进行疫苗研发。

 

02

 细胞转染分类

Part.1

按导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,

分为瞬转和稳转。

瞬转:外源基因得以表达但它们并不会整合到宿主细胞的基因组中,随细胞分裂逐渐丢失。

 

稳转:外源基因能够整合到细胞的基因组中,随细胞分裂持续表达,使得转染细胞的子代细胞也同样表达外源基因。

 

二者区别:

区别

瞬转

稳转

目的不同

短时间获得高水平的基因表达

获得稳定表达目的基因的细胞株 

稳定性不同

瞬时转染由于基因未整合到染色体体,稳定性较差

 

由于经过筛选,目的基因整合到染色体中,其稳定性好

方法不同

一般采用脂质体转染法 

 

一般更偏向于病毒转染、电转等方法

筛选过程不同

转染后一般不需要进行筛选

 

一般需要经过筛选,挑选出目的基因整合到宿主染色体中的细胞

质粒不同

质粒不需要带有抗性

 

一定要带有特定的抗性以便于后续的克隆株筛选

表达时效不同

目的基因的表达通常持续几天,不能稳定遗传

 

长时间稳定表达目的基因

实验周期不同

转染后24h-96h收细胞

2-3周甚至3-4周筛选出稳转细胞克隆

Part.2

按照方法分为物理介导法、化学介导法,

生物介导法。

物理介导法:通过物理的方法(例如电穿孔法、显微注射法)直接将外源核酸导入到细胞内,一般不需要使用任何化学物质。效率较高,但对细胞损伤大,细胞存活率低。

 

化学介导法:通过使用一些化学物质,如PEI、脂质体等,来改变细胞膜的物理和化学性质,使其对外源性DNA或RNA具有亲和力,从而实现基因转移。这种方法实验操作简单,周期短,但大多数不能长期稳定表达外源基因。

 

生物介导法:一般利用病毒作为载体,将外源基因包装后导入细胞,如慢病毒、腺病毒、逆转录病毒。这种方法可以实现外源基因的长期稳定表达,也可进行体内、体外高效、特异性的基因转移。但实验操作较为繁琐,实验周期较其他方法长。

 

图片

 

由此看来,细胞转染方法多种多样。选择哪种转染方法,取决于实验需求、实验室条件、细胞的类型和转染效率等因素。

 

目前,大多数实验室使用较多的主要有化学介导中的脂质体转染(质粒转染)和生物介导中的慢病毒转染法。质粒转染操作简单,但有些细胞系不容易转染,转染效率低,给实验带来很多不便。而病毒转染具有能够稳定表达,宿主范围广的优势,且其对非分裂的原代细胞、干细胞等具有较高的转染效率,同时体内外实验均有效,同样适用于体内活体动物实验,如动物成瘤等。

 

 

图片 图片

左:HEK293-GFP-40X

右:143B-GFP-100X

图片 图片

左:HCT116-GFP-40X                  

右:HUVEC SV40-GFP-100X

图片 图片

左:4T1-GFP-100X               

右:A549-RFP-100X

我们尚恩生物公司对常用的细胞系,原代细胞进行慢病毒转染,包括细胞慢病毒转染绿色荧光蛋白(ZsGreen)或者红色荧光蛋白(mCherry、RFP)、细胞慢病毒转染化学发光LUC、细胞慢病毒SV40永生化转染,总共近40种稳转细胞系。也可以进行指定细胞的慢病毒转染。

 

慢病毒转染服务

服务

编号

转染类别

试验目标

实验周期

SNTS-L001

GFP稳转

获得GFP稳定表达的细胞

3-4周

SNTS-L002

RFP稳转

获得RFP稳定表达的细胞

3-4周

SNTS-L003

mCherry稳转

获得mCherry稳定表达的细胞

3-4周

SNTS-L004

LUC稳转

获得LUC稳定表达的细胞

3-4周

SNTS-L005

SV40永生

获得SV40永生化的细胞(以原代细胞为主)

6-8周

 

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