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细胞攻略 | SK-LU-1(人低分化肺腺癌细胞)细胞培养教程
625 人阅读发布时间：2023-02-27 10:31
细 胞 基 本 信 息
▲SK-LU-1细胞正常生长形态照片
--细 胞 基 本 信 息---细胞名称: SK-LU-1(人低分化肺腺癌细胞)
细胞别称: SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01
细胞货号: SNL-229
生长特性: 贴壁
培养条件: DMEM+10% FBS+1% P/S
培养环境: 空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
细胞简介: SK-LU-1细胞来源于一名64岁患有肺腺癌（III级）的白人女性。SK-LU-1细胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1细胞支原体污染于1971年被发现并消除，可以用于3D细胞培养。
细 胞 冻 存 攻 略
冻存步骤:
1、先将细胞按传代步骤消化、离心，至传代步骤4，弃细胞上清，获得细胞沉淀；
2、加入适量预先配好的程序性冻存液轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至做好标记的冻存管中；
3、将冻存管放入程序性冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
4、转移细胞至液氮保存并登记细胞保存位置，液氮保存24h后建议复苏一管检测冻存细胞的活性，若活性合格即可长期保存，若低于80%建议重新冻存；
Tips：
◎1. 检测冻存细胞活性结果未合格前，培养瓶内细胞建议继续培养直至确认冻存合格方可视需要丢弃；
◎2. 程序性冻存液需要配合程序性冻存盒使用，若使用非程序冻存液可以按产品说明书处理降温过程；
◎3. T25培养瓶长满通常可以冻存2-3管，10cm皿长满可以冻存3-4管；
细 胞 复 苏 攻 略
复苏步骤:
1、将所需的完全培养基放在培养箱预热30min后开始复苏；
2、准备37度温水，将细胞从液氮罐取中出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，融化至米粒大小冰块，终止水浴；
3、将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心1-2min，不同离心机具体转速会有差异；
4、离心完成后，弃冻存液，用刚才预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至T25或者10cm皿中。
Tips：
◎1. 冻存管在液氮长期保存过程中难免渗入液氮，取出细胞时震动不要过大，水浴前一定要观察管内是否存在液氮，若有液氮建议静置一会待液氮完全蒸发后再水浴；
◎2. 水浴时可以使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源，以降低管盖缝隙渗入水导致污染的概率；
◎3. 水浴至剩米粒大小时及时终止水浴，避免过度水浴或水浴时间不足；
◎4. 建议水浴完成后直接在离心管内离心细胞，避免再次转移细胞；
◎5. 复苏后的细胞比较脆弱，吹打和转移细胞时尽量轻柔，复苏24h后换液去除死亡细胞；
#常见问题及解决方案
一、细胞密度怎么计算的？
严格意义上，细胞密度需要收集细胞悬液计数细胞数量，但在实际培养过程中，并不需要为了精确控制细胞数量而消化细胞计数。因此，常用的细胞密度指细胞相对于最大生长密度的比值，贴壁细胞可以粗略的用细胞所占培养容器底面积百分比表示，即显微镜下观察培养容器底部，有细胞的区域占总区域的百分比值，当然这种表达方式受限于单个细胞生长不同密度时所占面积不同导致并不严谨，但也是相对直观、简便的表现细胞状态的一种方式；
二、培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2. 细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可以先吸走培养基后用PBS润洗清除，再加新的培养基继续培养。润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
三、细胞具体消化时间是多久？
每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，不能完全规定消化时间，以实际消化效果和客户经验为准。
文 献 引 用
USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity
Journal: Nature Communications
DOI: https://doi.org/10.1038/s41467-022-35557-y
Date: 2022/12/23
Product name： SK-LU-1(人低分化肺腺癌细胞)
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