就一个实验室而言无论运作的多么好，总会因为革新技术或拓展方向二影响原来的流程，从而产生各种各样的问题。有些地方错误的操作有可能带来严重的后果，那么今天主要列举细胞生长缓慢的两大原因。

01培养体系出现问题

01

检查你所培养的细胞是否存在污染。

（1）如果培养细胞未添加抗生素，细胞污染则是不可避免的。

① 用肉眼和显微镜进行检查。

② 如果细胞被污染则要弃掉。

（2）由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测。

（3）检测可能污染的途径和原因。

02

检查你用于培养细胞的培养基和血清（例如：是否批次不同或厂商不同）。如果你常规使用的是粉剂或10×储存液，而现在购买的培养基更换为1×液体，而随后证明问题就出自于此。

03

如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。

（1）复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按（2）～（4）步的方法做排查。

 

（2）对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线，与以前培养该细胞的资料进行比较，检查是否有下列改变:

① 传代时是否接种密度过低。

② 细胞传代是否过于频繁。

③ 传代前细胞平台期是否过长。

（3）是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号，检查批号和供货商。

（4）是否细胞分离过程中严重损伤了细胞，应检测:

① 胰蛋白酶（其他消化试剂）消化时间是否过长。

② 消化液的浓度和活性是否过高、过强。

③ 胰蛋白酶消化时，孵箱温度是否过高。

④ 吹打消化细胞时是否过于用力。

⑤ 细胞是否对 EDTA过于敏感（如果添加了EDTA）。

⑥ 胰蛋白酶稀释是否有误。

⑦ 是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

 

02检查共用的设备和试剂

温度和孵箱湿度

温度设定不准

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a　自动调温器损坏。

b　开关孵箱门过于频繁。

c　孵箱门未关紧。

d　风扇损坏造成散热不均。

孵箱湿度不能维持

02

a　水盘中未加水。

b　孵箱有渗漏。

c　开关孵箱门过于频繁。

d　在Petri培养皿中放置一定量的PBS，每日称重，以检查蒸发率。

孵箱的CO2浓度不准

03

a　开关孵箱门过于频繁。

b　CO2控制器出现问题。

产/品/推/荐

产品名称：BEAS-2B(人正常肺支气管上皮细胞)

货号：SNL-203

产品名称：特级胎牛血清（来自南美纯正血源）

货号：SNS-002

产品名称：胰酶（含EDTA）

货号：SNT-002

公 司 简 介

武汉尚恩生物技术有限公司坐落于武汉东湖高新区光谷生物城，专注于细胞及系列产品的研发、生产和服务，公司建有标准化GMP实验室、动物房，已整体通过ISO 9001:2015质量管理体系认证，获得高新技术企业、3551人才、瞪羚企业、科技小巨人等多项荣誉。　　

公司主要研发生产细胞系、原代细胞、胎牛血清、基础培养基、完全培养基、辅助试剂等系列产品，提供细胞及培养配套产品一站式采购；细胞库冻存细胞系500余种，同时通过不间断引种细胞扩大丰富细胞种类；公司还提供人源细胞系的STR鉴定、大小鼠的种属鉴定服务等。　　

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