【常见问题】实验有杂质如何纯化原代细胞？

（1）在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片，通过悬浮在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清液。重复清洗2到3次。

（2）将盛有组织碎片的容器置于冰上，去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的平衡盐溶液中的胰蛋白酶（100 mg组织加入1ml 胰蛋白酶）。

（3）在4℃孵育6到18小时，使几乎没有胰蛋白酶活性的酶尽可能渗透进去。

（4）移弃组织碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含残留胰蛋白酶的组织碎片20到30分钟。

（5)在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基，要加入大豆胰蛋白酶抑制剂。

(6)通过无菌不锈钢丝网（100～200 mm）过滤，分散所有剩余组织。计数和接种细胞，进行培养。


  2.胶原酶纯化法  

（1）用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片，用不含钙镁的平衡盐溶液清洗组织碎片几次。

（2）加入Dispase（0.6～2.4单位/ml 溶解在无钙镁的平衡盐溶液）

（3）在37℃孵育20分钟到几个小时。

（4）通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的Dispase。

（5）通过离心在平衡盐溶液中清洗悬液几次。

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